BMP-6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401979-ACT

Das humane BMP6 kodiert das bone morphogenetic protein 6 (BMP-6), einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der über BMP-Typ-I/-II-Rezeptoren signalisiert, um SMAD1/5/8 sowie Transkriptionsprogramme zu aktivieren, die osteogene Differenzierung, Umbau der extrazellulären Matrix und Entwicklungs-Musterbildung steuern. BMP-6 interagiert außerdem mit MAPK- und PI3K-assoziierten Signalwegen, um in kontextabhängiger Weise Zellschicksalsentscheidungen und die Gewebehomöostase zu beeinflussen. In der Leber ist BMP-6 ein zentraler upstream-Regulator des Eisenstoffwechsels über die Induktion von Hepcidin (HAMP) und verknüpft damit BMP/SMAD-Signalisierung mit der systemischen Eisenbalance. Eine fehlregulierte Aktivität des BMP6-Signalwegs wurde mit veränderter Knochenbiologie, fibroseassoziierten Prozessen und Phänotypen der Eisenhomöostase in Verbindung gebracht, was BMP6 für mechanistische Studien zur BMP-Signalisierung und metabolischen Regulation relevant macht.

BMP-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BMP6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BMP-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BMP6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BMP6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BMP-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BMP6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BMP-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BMP-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BMP6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.