BMP-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400543-ACT

BMP4 codifica la proteina morfogenetica dell’osso 4 (BMP-4), un ligando secreto della superfamiglia del TGF-β che trasduce il segnale attraverso recettori di tipo I/II con attività chinasi serina/treonina, attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/8. BMP-4 è un morfogeno chiave che regola il patterning embrionale, la specificazione del mesoderma, la differenziazione osteogenica e condrogenica e le decisioni di destino delle cellule staminali, con ulteriore crosstalk verso le vie MAPK a seconda del contesto cellulare. Nei tessuti adulti, BMP4 contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare, a segnali angiogenici e alle dinamiche epitelio–mesenchimali. Una segnalazione di BMP4 deregolata è stata implicata in anomalie dello sviluppo ed è spesso studiata in oncologia, nella fibrosi e in modelli di malattie vascolari come regolatore dello stato di differenziazione e della segnalazione del microambiente.

BMP-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BMP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BMP-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BMP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BMP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BMP-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BMP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BMP-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BMP-4 nelle cellule tumorali con espressione di BMP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.