BMP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402432-ACT

BMP1 kodiert das Bone Morphogenetic Protein 1 (BMP-1), eine sezernierte Metalloprotease der Astacin-Familie, die die Reifung der extrazellulären Matrix (ECM) vorantreibt, indem sie Prokollagene proteolytisch verarbeitet und matrixassoziierte Faktoren aktiviert. Durch Spaltungsereignisse, die die Kollagenfibrillogenese und die Organisation der Basalmembran unterstützen, trägt BMP-1 zur Architektur des Bindegewebes, zum Gewebeumbau und zum ECM-Umsatz im Rahmen der Wundheilung bei. Die BMP-1-Aktivität ist funktionell mit der TGF-β-Signalgebung und matrizellulären Signalwegen verknüpft, indem sie die Verfügbarkeit und den Aktivierungszustand von an die ECM gebundenen Wachstumsfaktoren und strukturellen Komponenten moduliert. Eine dysregulierte BMP1-Expression oder Proteaseaktivität wurde mit fibrotischem Umbau sowie erblichen Bindegewebsphänotypen in Verbindung gebracht, die durch eine veränderte Kollagenprozessierung gekennzeichnet sind.

BMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BMP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BMP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BMP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BMP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BMP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BMP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BMP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BMP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.