Bmi-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417606-ACT

BMI1 kodiert das Polycomb-Gruppenprotein Bmi-1, eine zentrale Komponente des Polycomb-repressiven Komplexes 1 (PRC1), der epigenetische Genrepression durch Chromatinkondensation und H2A-Ubiquitinierung aufrechterhält. Bmi-1 reguliert Transkriptionsprogramme, die Selbsterneuerung, Linienfestlegung und Zellzyklusprogression steuern, einschließlich der Repression des CDKN2A/INK4A–ARF-Lokus und der Modulation von Seneszenz-Checkpoints. Über diese Funktionen beeinflusst BMI1 DNA-Schadensantworten, die Toleranz gegenüber oxidativem Stress sowie stammzellähnliche Phänotypen in unterschiedlichen Zellkontexten. Eine fehlregulierte BMI1-Aktivität wurde breit mit onkogenen Transkriptionszuständen und veränderter Differenzierung in mehreren krankheitsrelevanten Modellen in Verbindung gebracht, wodurch BMI1 ein häufiges Ziel in der Epigenetik- und Krebsbiologie-Forschung ist.

Bmi-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BMI1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bmi-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BMI1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BMI1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bmi-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BMI1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bmi-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bmi-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BMI1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.