BMAL1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419206-LAC

Arntl kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-PAS-Transkriptionsfaktor BMAL1, eine Schlüsselkomponente der zirkadianen Uhr von Säugetieren, die mit CLOCK/NPAS2 heterodimerisiert, um über E-Box-Elemente eine rhythmische Transkription anzutreiben. BMAL1 reguliert die oszillierende Expression von Genen, die Stoffwechsel, Redox-Homöostase, DNA-Schadensantworten und Immun-Signalwege steuern, und verknüpft so die zelluläre Zeitgebung mit dem physiologischen Zustand. Eine Störung BMAL1-abhängiger Transkriptionsprogramme wird mit Phänotypen einer zirkadianen Fehlanpassung sowie mit einer veränderten Anfälligkeit in Modellen für Stoffwechselstörungen, Entzündungen und neuroverhaltensbezogene Prozesse in Verbindung gebracht. In Mausmodellen dient Arntl als zentraler Knotenpunkt zur Untersuchung transkriptioneller Rückkopplungsschleifen mit PER- und CRY-Repressoren sowie nachgeschalteter, uhrkontrollierter Gen-Netzwerke.

BMAL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Arntl-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

BMAL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Arntl-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen BMAL1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Arntl-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.