Plasmide Double Nickase (h) BMAL1: sc-400808-NIC

ARNTL code pour BMAL1, un facteur de transcription central de la famille bHLH-PAS (basic helix–loop–helix PAS) qui s’hétérodimérise avec CLOCK/NPAS2 afin de piloter l’expression des gènes circadiens via des éléments E-box. Cet oscillateur transcriptionnel coordonne la synchronisation cellulaire du métabolisme, de l’homéostasie redox, du contrôle du cycle cellulaire et des réponses aux dommages de l’ADN, en intégrant des signaux issus des voies hépatiques, immunitaires et neuronales. L’activité de BMAL1 influence la régulation rythmique de la fonction mitochondriale, du métabolisme des lipides et du glucose, ainsi que des programmes transcriptionnels inflammatoires, faisant d’ARNTL un nœud clé reliant la perturbation circadienne à des phénotypes cardiométaboliques, à des troubles neurocomportementaux et à un remodelage transcriptionnel associé aux tumeurs. En conséquence, ARNTL est largement étudié en chronobiologie et en biologie des systèmes pour cartographier les réseaux contrôlés par l’horloge et leurs effets fonctionnels en aval.

BMAL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARNTL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARNTL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARNTL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARNTL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.