BLVRB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405988-ACT

Humanes BLVRB (Biliverdin-Reduktase B) ist eine zytosolische, NAD(P)H-abhängige Oxidoreduktase, die die Reduktion von Biliverdin IXβ zu Bilirubin katalysiert und damit zum Hämabbau sowie zur zellulären Redoxhomöostase beiträgt. Durch die Modulation der Spiegel von Biliverdin und Bilirubin beeinflusst BLVRB die antioxidative Kapazität, die Pufferung reaktiver Sauerstoffspezies und nachgeschaltete, stressresponsive Signalwege, die mit metabolischer Anpassung und Entzündung verknüpft sind. Die BLVRB-Aktivität steht zudem mit der erythroiden Physiologie und dem Hämoglobinumsatz in Zusammenhang und verbindet sie mit Signalwegen, die den Eisenhaushalt und die Kontrolle oxidativer Schäden steuern. Eine dysregulierte Hämbiologie und ein Redoxungleichgewicht sind an zahlreichen hämatologischen und metabolischen Erkrankungen beteiligt, wodurch BLVRB einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu oxidativen Stressantworten und zum Pigmentstoffwechsel darstellt.

BLVRB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BLVRB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BLVRB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BLVRB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BLVRB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BLVRB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BLVRB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BLVRB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BLVRB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BLVRB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.