BLM hydrolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404411

Übersicht

Das menschliche Gen **BLMH** kodiert die Bleomycin-Hydrolase, eine zytosolische Cystein-Aminopeptidase, die an der proteolytischen Verarbeitung intrazellulärer Peptide und an der Aufrechterhaltung der Proteinhomöostase (Protein-Qualitätskontrolle) beteiligt ist. BLMH trägt zum Recycling von Aminosäuren bei und wird über seine Effekte auf den Peptidumsatz und Proteostase-Netzwerke mit zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht. Veränderte BLMH-Aktivität wurde im Kontext des Arzneistoffmetabolismus und der Anfälligkeit für Bleomycin-induzierte Zytotoxizität untersucht; zudem wurden mögliche Zusammenhänge mit neurodegenerativen und entzündlichen Phänotypen erforscht, bei denen Peptid-Clearance-Mechanismen gestört sind. Als breit exprimiertes Enzym stellt BLMH einen nützlichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie peptidaseabhängige Homöostase mit oxidativem Stress sowie Signalwegen der Schadens- und Stressantwort zusammenwirkt.

Das BLM hydrolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BLMH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BLMH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BLMH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BLM hydrolase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BLMH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BLM hydrolase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BLMH-Exone abzielen, die für die BLM hydrolase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BLMH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BLM hydrolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BLM hydrolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BLMH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BLM hydrolase HDR-Plasmid (h) und BLM hydrolase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BLMH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BLMH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.