BLCAM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401451-ACT

CD22 (BLCAM) é uma lectina do tipo imunoglobulina ligante de ácido siálico, restrita a células B, que atua como correceptor inibitório do receptor de células B (BCR), ajustando os limiares de sinalização induzidos por antígenos. Por meio de motivos inibitórios baseados em tirosina de receptores imunes (ITIMs), recruta fosfatases como SHP-1/SHIP para modular a atividade de quinases proximais e vias a jusante, incluindo PI3K/AKT, MAPK e o fluxo de cálcio, moldando assim a ativação, a sobrevivência e a tolerância das células B. O CD22 também contribui para a adesão e o tráfego de células B por meio de interações dependentes de glicanos na superfície celular. A expressão ou a sinalização desregulada de CD22 tem sido associada a alterações na homeostase imune e é frequentemente estudada no contexto de neoplasias de células B e de fenótipos de células B relevantes para autoimunidade.

CD22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD22 em células tumorais com expressão de CD22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.