Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Bim Double Nickase Plasmid (m2): sc-419332-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Bim Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Bim Double-Nickase-Plasmid (m2) und Bim Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Bcl2l11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Bim: sc-374358
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Bim Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen Bcl2l11 kodiert das BH3-only-Protein Bim aus der Bcl-2-Familie, einen starken proapoptotischen Regulator, der die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran fördert, indem er antiapoptotische Bcl-2-Proteine antagonisiert und Bax/Bak aktiviert. Bim integriert Signale aus Zytokin-Entzug, oxidativem und ER-Stress sowie aus Wachstumsfaktor-Signalwegen einschließlich PI3K–AKT und MAPK/ERK und prägt damit die intrinsische Apoptose, die Homöostase von Immunzellen und die Toleranz durch die Eliminierung autoreaktiver Lymphozyten. Eine fehlregulierte Bcl2l11/Bim-Aktivität wurde in präklinischen Modellen mit veränderter Lymphozyten-Überlebensfähigkeit, Autoimmunität und dem Fortbestehen von Tumorzellen in Verbindung gebracht, was Bim zu einem zentralen Knotenpunkt in Netzwerken der Stressantwort und Zellschicksalsentscheidung macht. Die Geneditierung von Bcl2l11 in der Maus unterstützt mechanistische Studien zur Apoptose-Signalgebung, zu hämatopoetischen und immunologischen Phänotypen sowie zu kontextspezifischen Abhängigkeiten in Krebs- und Entzündungskrankheitsmodellen.
Bim Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Bcl2l11-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Bcl2l11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Bcl2l11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Bcl2l11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.