Plasmide CRISPR/Cas9 KO BGT-1 (m): sc-420468

Présentation

Slc6a12 code le transporteur de la bétaïne/GABA BGT‑1 (SLC6A12), un membre de la famille des transporteurs de neurotransmetteurs SLC6 dépendant du Na⁺/Cl⁻, qui assure l’entrée cellulaire de l’osmolyte bétaïne et peut transporter le GABA dans certains contextes. BGT‑1 contribue à l’adaptation au stress osmotique et à la régulation du volume cellulaire en favorisant l’accumulation intracellulaire d’osmolytes organiques, reliant le transport membranaire aux programmes d’osmoprotection et à l’homéostasie métabolique. Dans les tissus murins, l’expression de Slc6a12 a été étudiée dans les épithéliums rénaux et au sein du système nerveux, où une activité altérée du transporteur peut moduler le tonus inhibiteur et la signalisation liée aux réponses au stress. La dérégulation de la gestion des osmolytes et de l’équilibre GABAergique est pertinente dans des modèles de lésion rénale osmotique, de neuroinflammation et de susceptibilité aux crises, ce qui fait de Slc6a12 une cible utile pour des études mécanistiques des voies biologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BGT-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc6a12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc6a12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc6a12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BGT-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc6a12 pour l'étude de la signalisation de BGT-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc6a12 essentiels à la fonction de BGT-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc6a12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BGT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le BGT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc6a12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BGT-1 plasmide HDR (m) et le BGT-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc6a12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc6a12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.