Plásmido Doble Nickase (h) BF-1: sc-402933-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BF-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BF-1 (h) y el plásmido de doble nickasa BF-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FOXG1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BF-1 Anticuerpo (D-12): sc-518188
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BF-1 | sc-402933-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BF-1 | sc-402933-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXG1 codifica el factor de transcripción de la familia forkhead box BF-1, un regulador clave del patrón del telencéfalo, de la proliferación de progenitores neuronales y del momento de la diferenciación durante el desarrollo del cerebro humano. BF-1 moldea programas de expresión génica que influyen en la neurogénesis y en la identidad regional mediante represión/activación transcripcional, con efectos posteriores sobre el control del ciclo celular y las vías de especificación de linaje. La alteración de la dosis o la función de FOXG1 se asocia estrechamente con fenotipos del neurodesarrollo, incluido el síndrome FOXG1 y presentaciones más amplias dentro del espectro autista y de las encefalopatías epilépticas. En modelos celulares, la perturbación de FOXG1 se utiliza para estudiar la competencia de progenitores corticales, la maduración neuronal y fenotipos de actividad de red relevantes para trastornos del desarrollo.
BF-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXG1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXG1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXG1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXG1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.