betaKlotho CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401614

Übersicht

KLB kodiert betaKlotho, einen Single-Pass-Transmembran-Korezeptor, der endokrinen Fibroblasten-Wachstumsfaktoren – insbesondere FGF19 und FGF21 – durch die Bildung von Komplexen mit FGFRs Ligandenspezifität verleiht. In menschlichen Geweben wie Leber und Fettgewebe reguliert betaKlotho-abhängige Signalübertragung die Aktivierung des MAPK/ERK-Signalwegs sowie Transkriptionsprogramme, die die Gallensäurehomöostase, Lipidverwertung, den Glukosestoffwechsel und die Energiebilanz steuern. Eine veränderte KLB-Expression oder betaKlotho-Funktion wurde mit metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht, darunter adipositasassoziierte Phänotypen, Insulinresistenz und nichtalkoholische Fettlebererkrankung, und kann zudem Stress- und Entzündungssignale in metabolisch aktiven Zellen modulieren. Diese Eigenschaften machen KLB zu einem nützlichen Knotenpunkt, um endokrine FGF-Signalwege und gewebespezifische metabolische Wechselwirkungen zu untersuchen.

Das betaKlotho CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die betaKlotho-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der betaKlotho-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLB-Exone abzielen, die für die betaKlotho-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom betaKlotho CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom betaKlotho CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das betaKlotho HDR-Plasmid (h) und betaKlotho HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.