beta Tubulin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400044-ACT

Das humane Gen **TUBB** kodiert **Beta-Tubulin**, eine zentrale strukturelle Untereinheit von Mikrotubuli, die gemeinsam mit Alpha-Tubulin polymerisiert, um die mitotische Spindel aufzubauen und die Architektur des Zytoskeletts aufrechtzuerhalten. Die Dynamik von Beta-Tubulin unterstützt die Chromosomentrennung, den intrazellulären Transport über Kinesin- und Dynein-Motoren, die Zellpolarität sowie zilienbezogene Prozesse durch kontinuierlichen Umbau von Mikrotubuli. Die TUBB-Aktivität steht in Wechselwirkung mit der Zellzyklusregulation und mikrotubulusabhängiger Signalgebung, die Proliferation und Migration mitprägt. Veränderte Tubulinexpression oder ein verändertes Mikrotubulusverhalten ist breit relevant für Studien zu chromosomaler Instabilität, zu neuroentwicklungs- und neurodegenerativen Mechanismen sowie zu zytoskelettgetriebenen Veränderungen, wie sie in der Krebszellbiologie beobachtet werden.

beta Tubulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TUBB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

beta Tubulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TUBB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TUBB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen beta Tubulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TUBB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von beta Tubulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des beta Tubulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TUBB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.