Plásmido Doble Nickase (h) beta-catenin: sc-400038-NIC

CTNNB1 codifica la beta-catenina humana, una proteína multifuncional que conecta las uniones adherentes basadas en cadherinas con el citoesqueleto de actina y actúa como correagulador transcripcional en la señalización canónica de Wnt. En ausencia de ligandos Wnt, la beta-catenina es fosforilada por el complejo de destrucción APC–AXIN–GSK3 y dirigida a la degradación proteasomal, mientras que la activación de la vía estabiliza la beta-catenina y promueve la coactivación nuclear de programas génicos dependientes de TCF/LEF que controlan la proliferación, la diferenciación y el mantenimiento de células madre. La actividad o estabilización aberrante de CTNNB1 altera las decisiones de destino celular, la integridad epitelial y los patrones del desarrollo, y con frecuencia se implica en señalización oncogénica y displasia específica de tejidos. Como efector nodal que integra la adhesión celular y las salidas de la vía Wnt, CTNNB1 se estudia ampliamente en contextos como la transición epitelio-mesenquimal (EMT), la inhibición por contacto, la biología de organoides y el “crosstalk” de la vía con Hippo y la señalización por factores de crecimiento.

beta-catenin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTNNB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTNNB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTNNB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTNNB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.