beta-catenin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400038-ACT

CTNNB1 kodiert β-Catenin, ein multifunktionales Protein, das cadherinbasierte Adherens Junctions mit dem Aktinzytoskelett verbindet und als zentraler transkriptioneller Co‑Regulator im kanonischen Wnt-Signalweg fungiert. Als Reaktion auf die Aktivierung des Wnt-Signalwegs akkumuliert stabilisiertes β‑Catenin im Zellkern und bildet mit TCF/LEF‑Faktoren Komplexe, um Genprogramme zu steuern, die Proliferation, Differenzierung und stammzellähnliche Zellzustände regulieren. Die Aktivität von CTNNB1 ist in die Dynamik des APC/AXIN/GSK3β‑Destruktionskomplexes eingebettet und überschneidet sich mit Signalwegen, die die epitheliale Organisation und Zellschicksalsentscheidungen kontrollieren. Fehlregulierte β‑Catenin‑Signalgebung und veränderte Zell‑Zell‑Adhäsion werden häufig mit onkogener Transformation und Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, weshalb CTNNB1 ein häufiges Ziel mechanistischer Studien in der Signaltransduktion und Zellbiologie ist.

beta-catenin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTNNB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

beta-catenin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTNNB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTNNB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen beta-catenin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTNNB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von beta-catenin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des beta-catenin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTNNB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.