Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
BECN1/Beclin-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400139-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BECN1/Beclin-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BECN1/Beclin-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und BECN1/Beclin-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BECN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BECN1/Beclin-1: sc-48341
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BECN1/Beclin-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400139-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BECN1/Beclin-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400139-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BECN1 (Beclin-1) ist ein zentraler Regulator der Autophagie-Initiation und der Autophagosomen-Nukleation, indem es die Assemblierung des PI3K-Komplexes der Klasse III mit PIK3C3/VPS34, ATG14 und UVRAG vermittelt. Durch die Koordination der Produktion von Phosphatidylinositol-3-phosphat an entstehenden Phagophoren verknüpft Beclin-1 Nährstoffsensorik und Stressantworten mit lysosomalen Abbauwegen und beeinflusst so Proteostase, die Qualitätskontrolle von Organellen und die angeborene Immun-Signalübertragung. Die Aktivität von BECN1 wird durch Interaktionen mit Proteinen der BCL2-Familie sowie durch Phosphorylierungsereignisse moduliert, die Signale aus mTOR-, AMPK- und apoptotischen Signalwegen integrieren. Eine Dysregulation der BECN1-abhängigen Autophagie wird mit Neurodegeneration, Infektionsbiologie und krebsassoziierter zellulärer Anpassung in Verbindung gebracht, weshalb BECN1 häufig als Knotenpunkt in Netzwerken der Homöostase und Stressantwort untersucht wird.
BECN1/Beclin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BECN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BECN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BECN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BECN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.