Plásmido CRISPR de Activación (m) BDNF: sc-419319-ACT

El Bdnf de ratón codifica el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), una neurotrofina secretada que se une a TRKB/NTRK2 y a p75NTR para regular la supervivencia neuronal, la diferenciación, la plasticidad sináptica y la remodelación de circuitos dependiente de la actividad. La señalización de BDNF activa las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ para modular programas transcripcionales, la dinámica de las espinas dendríticas y la liberación de neurotransmisores. En el sistema nervioso central, BDNF es fundamental para los procesos de aprendizaje y memoria y contribuye a la plasticidad dependiente de la experiencia. Las alteraciones en la expresión o la señalización de Bdnf se han vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y se estudian ampliamente en modelos de neurodegeneración, respuesta al estrés y regulación metabólica.

BDNF El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bdnf sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BDNF El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bdnf en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bdnf, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BDNF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bdnf y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BDNF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BDNF en células tumorales con expresión de Bdnf silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.