Plásmido CRISPR de Activación (h) BCLAF1: sc-403820-ACT

BCLAF1 (factor de transcripción 1 asociado a BCL2) es una proteína nuclear de unión a ADN/ARN que regula programas de transcripción y el procesamiento del ARNm, conectando el control asociado a la cromatina con el empalme alternativo y la estabilidad del ARN. Participa en respuestas al estrés celular y en procesos relacionados con el daño del ADN mediante interacciones con reguladores transcripcionales y componentes del espliceosoma, influyendo en la progresión del ciclo celular y en la señalización asociada a la apoptosis. Se ha reportado una expresión o función desregulada de BCLAF1 en múltiples contextos tumorales y en estados relacionados con el sistema inmunitario, donde las alteraciones en la regulación transcripcional y postranscripcional pueden remodelar redes génicas de proliferación, supervivencia e inflamación. Estas propiedades hacen de BCLAF1 un nodo útil para diseccionar el acoplamiento transcripción–empalme y el crosstalk entre vías en condiciones basales y de estrés.

BCLAF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCLAF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCLAF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCLAF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCLAF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCLAF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCLAF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCLAF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCLAF1 en células tumorales con expresión de BCLAF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.