Plasmide CRISPR/Cas9 KO Bcl-w (h): sc-402639

Présentation

BCL2L2 code pour Bcl-w, un membre anti-apoptotique de la famille BCL-2 qui préserve l’intégrité de la membrane externe mitochondriale en freinant des effecteurs pro-apoptotiques tels que BAX et BAK. En contrôlant l’apoptose mitochondriale, Bcl-w influence les décisions de mort cellulaire intrinsèque en réponse au retrait de facteurs de croissance, aux dommages à l’ADN et au stress oxydatif, modulant ainsi la survie cellulaire, l’adaptation au stress et l’homéostasie tissulaire. L’activité de BCL2L2 s’inscrit à l’interface de voies régulant la dynamique mitochondriale et les signaux de survie, notamment des entrées associées à PI3K/AKT et aux MAPK qui convergent vers l’équilibre des membres de la famille BCL-2. Une expression dérégulée de Bcl-w a été associée à une modification des seuils d’apoptose et à des phénotypes de survie pertinents pour l’oncogenèse et la réponse aux traitements dans plusieurs contextes tumoraux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Bcl-w (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BCL2L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BCL2L2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BCL2L2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Bcl-w.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BCL2L2 pour l'étude de la signalisation de Bcl-w, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BCL2L2 essentiels à la fonction de Bcl-w
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BCL2L2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Bcl-w plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Bcl-w plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BCL2L2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Bcl-w plasmide HDR (h) et le Bcl-w (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BCL2L2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BCL2L2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.