Bcl-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400025-ACT

BCL2 codiert für Bcl-2, ein integrales Protein der äußeren Mitochondrienmembran, das die Apoptose unterdrückt, indem es die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran begrenzt und die Freisetzung von Cytochrom c einschränkt. Durch die Sequestrierung proapoptotischer BH3-only-Proteine und die Antagonisierung der Aktivierung von BAX/BAK fungiert Bcl-2 als zentraler Knotenpunkt im intrinsischen Apoptoseweg und prägt zelluläre Antworten auf Stress, Entzug von Wachstumsfaktoren und DNA-Schäden. Die BCL2-Aktivität überschneidet sich mit Überlebens-Signalnetzwerken, darunter die PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege, und beeinflusst die mitochondriale Dynamik sowie die Redox-Homöostase. Eine fehlregulierte BCL2-Expression ist in Krebs häufig mit einer verminderten apoptotischen Bereitschaft („apoptotic priming“) assoziiert und trägt zum aberranten Überleben maligner und von Immunzellpopulationen bei, was sie für Studien zu Onkogenese, Therapieansprechen und Immunhomöostase breit relevant macht.

Bcl-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bcl-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bcl-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bcl-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bcl-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.