Bcl-11b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403460-ACT

BCL11B kodiert den Transkriptionsfaktor Bcl-11b, ein C2H2-Zinkfingerprotein, das als linienbestimmender Regulator der T‑Zell-Entwicklung und der Thymozytendifferenzierung fungiert. Es integriert Signale aus zentralen Entwicklungswegen, darunter Notch- und TCR-gesteuerte Transkriptionsprogramme, um den Chromatinzustand zu steuern und Genexpressionsnetzwerke zu koordinieren, die Proliferation, Überleben und Festlegung der Zelllinie regulieren. Eine fehlregulierte BCL11B-Aktivität wurde mit veränderter Identität von Immunzellen und aberranter Transkriptionskontrolle in hämatologischen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was BCL11B zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise macht. In humanen Zellmodellen wird die gezielte Veränderung der Bcl-11b-Spiegel häufig genutzt, um Differenzierung, Enhancer-Logik und die Zusammenarbeit von Transkriptionsfaktoren zu untersuchen.

Bcl-11b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL11B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bcl-11b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL11B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL11B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bcl-11b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL11B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bcl-11b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bcl-11b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL11B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.