Bcl-11a CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403612-ACT

BCL11A kodiert den Transkriptionsfaktor Bcl-11a, ein Zinkfinger-DNA-bindendes Protein, das die Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) und Differenzierungsprogramme reguliert, insbesondere in hämatopoetischen und immunologischen Kompartimenten. Es wirkt in der chromatinassoziierten transkriptionellen Kontrolle, indem es mit koregulatorischen Komplexen zusammenwirkt und so Genexpressionsnetzwerke formt, die an Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Entwicklungszeitsteuerung beteiligt sind. BCL11A ist eng mit der Regulation erythroider Globine und einer umfassenderen epigenetischen Kontrolle der hämatopoetischen Reifung verknüpft und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt in Signalwegen dar, die den Hämoglobinwechsel (Hemoglobin Switching) und die lymphoide Entwicklung steuern. Eine fehlregulierte BCL11A-Aktivität wurde mit der Biologie hämatologischer Erkrankungen und veränderten Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in funktionellen Genomikstudien unterstützt.

Bcl-11a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL11A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bcl-11a Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL11A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL11A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bcl-11a-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL11A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bcl-11a-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bcl-11a-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL11A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.