Particules Lentivirales d'Activation (h) BCKDE1A: sc-417950-LAC

BCKDHA code la sous-unité E1α du complexe mitochondrial branched-chain α-ketoacid dehydrogenase (BCKDH), un nœud enzymatique clé de la dégradation oxydative des acides aminés à chaîne ramifiée leucine, isoleucine et valine. Dans la matrice mitochondriale, BCKDH relie le renouvellement des acides aminés au métabolisme central du carbone en générant des dérivés acyl-CoA qui alimentent des voies en aval productrices d’énergie et soutiennent l’homéostasie métabolique. La fonction de BCKDHA s’intègre aux processus de décarboxylation oxydative dépendants de cofacteurs ainsi qu’au contrôle qualité mitochondrial, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier la détection des nutriments et le métabolisme mitochondrial. Une perturbation ou une dérégulation de BCKDHA est associée à une altération du métabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée et est impliquée dans des erreurs innées du métabolisme telles que la maladie des urines au sirop d’érable.

Les particules d'activation lentivirales BCKDE1A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BCKDHA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BCKDE1A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BCKDHA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BCKDE1A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BCKDHA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.