BChE CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401834-ACT

ヒトのBCHE遺伝子は、ブチリルコリンエステラーゼ（BChE）をコードしている。BChEは分泌型のセリン加水分解酵素で、血漿中に豊富に存在し、コリンエステルを加水分解する。アセチルコリンエステラーゼが十分でない状況では、アセチルコリンを代謝することでコリン作動性シグナル伝達の調節にも寄与する。さらにBChEは、外因性化学物質（ゼノバイオティクス）やエステル系薬剤の代謝にも関与し、神経伝達物質の利用可能性や脂質関連経路の調節を介して、炎症および代謝プロセスに影響を及ぼし得る。BCHEの遺伝的多型や発現変化は、神経筋遮断薬や有機リン曝露に対する感受性の違いと関連づけられており、神経変性や代謝表現型の文脈でも研究されてきた。これらの特性により、BCHEはコリンエステラーゼ生物学、解毒機構、全身的な酵素制御を研究する上で有用な標的となる。

BChE CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCHEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BChE CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCHE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCHE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BChEの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCHE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBChE依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCHE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBChE経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。