BCDO2 Double Nickase Plasmid (h): sc-413515-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BCDO2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BCDO2 Double-Nickase-Plasmid (h) und BCDO2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BCO2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BCDO2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-413515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BCDO2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-413515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCO2 kodiert die β-Carotin-9′,10′-Oxygenase 2 (BCDO2), ein mitochondriales, carotinoidspaltendes Enzym, das die oxidative Spaltung von Carotinoiden zu Apocarotinoiden katalysiert und dadurch die intrazellulären Carotinoidspiegel sowie nachgeschaltete, retinoidbezogene Signalwege reguliert. Durch die Kontrolle des Carotinoidumsatzes beeinflusst BCDO2 das mitochondriale Redoxgleichgewicht und kann oxidative Stressantworten modulieren, die mit dem Lipidstoffwechsel und der zellulären Homöostase verknüpft sind. Eine veränderte BCO2-Aktivität wurde mit interindividuellen Unterschieden im Carotinoidstoffwechsel in Verbindung gebracht und im Kontext metabolischer Merkmale sowie oxidativ-stressbezogener zellulärer Phänotypen untersucht. Diese Eigenschaften machen BCO2 zu einem nützlichen Ziel für Studien zur mitochondrialen Stoffwechselregulation, zum Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und zu apocarotinoidabhängigen Transkriptionsprogrammen in menschlichen Zellen.
BCDO2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BCO2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BCO2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BCO2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BCO2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.