BBS4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403421-ACT

BBS4は、一次繊毛への（および一次繊毛からの）膜受容体やシグナル伝達タンパク質の輸送を仲介する多タンパク質複合体BBSomeの中核構成要素をコードしています。鞭毛内輸送（IFT）と繊毛膜組成の調整を通じて、BBS4は繊毛形成を支えるとともに、Hedgehog経路をはじめとするGPCR連関型のシグナル伝達ネットワークなど、繊毛依存的な経路を制御します。BBS4の機能障害は、繊毛シグナル伝達のダイナミクスと、繊毛をもつ組織における細胞恒常性を乱します。BBS4の変異はバルデー＝ビードル症候群と関連しており、繊毛輸送の変化が神経発達、代謝、感覚系の生物学研究に関わる多系統の表現型につながることを示しています。

BBS4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BBS4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BBS4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BBS4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBBS4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BBS4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBBS4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBBS4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBBS4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBBS4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。