bassoon CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406918

概要

BSNは、シナプス前部の細胞骨格マトリックスに存在する大型の足場タンパク質であるbassoonをコードしており、アクティブゾーンを組織化して効率的な神経伝達物質放出を支えます。Bassoonは、シナプス小胞のドッキングとプライミングに寄与し、シナプス小胞プールを電位依存性Ca²⁺流入に結び付けるとともに、シナプス形成およびシナプス維持の過程で他のアクティブゾーン構成要素との相互作用を調整します。シナプス前部の組み立てや小胞サイクル動態における役割を通じて、BSNは神経回路の結合性、シナプス可塑性、活動依存的な神経伝達を制御する経路の研究対象となっています。Bassoonに関連するシナプス構築の変化は、シナプス前機能障害が共通の細胞表現型としてみられる神経発達障害および神経精神疾患の機序との関連で検討されています。

bassoon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBSN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BSN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BSNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、bassoonタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、bassoonシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BSN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• bassoonの機能に不可欠なBSNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BSNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• bassoon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびbassoon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BSN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  bassoon HDRプラスミド（h）および bassoon HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBSNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBSN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。