Bag-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402929

Übersicht

BAG3 kodiert das Co-Chaperon Bag-3, einen stressinduzierbaren Regulator der Proteinkontrolle, der mit HSP70 und kleinen Hitzeschockproteinen zusammenwirkt, um chaperon-unterstützte selektive Autophagie und Proteostase zu koordinieren. Bag-3 beeinflusst Apoptose- und Zellüberlebenssignale, indem es Interaktionen innerhalb der BCL2-Familie moduliert und Zytoskelettdynamik mit Stressantworten verknüpft – über Signalwege, zu denen unter anderem die Autophagie–Lysosomen-Funktion und der ubiquitinabhängige Proteinabbau gehören. In menschlichen Zellen ist die BAG3-Aktivität daran beteiligt, die mitochondriale und sarkomerische Integrität aufrechtzuerhalten und Reaktionen auf proteotoxischen, mechanischen und oxidativen Stress zu regulieren. Eine Fehlregulation BAG3-assoziierter Netzwerke wurde mit Kardiomyopathien, Mechanismen neurodegenerativer Erkrankungen sowie krebsrelevanter Stressadaptation in Verbindung gebracht, was BAG3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Homöostase und Remodeling unter Stress macht.

Das Bag-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BAG3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BAG3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BAG3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Bag-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BAG3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Bag-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BAG3-Exone abzielen, die für die Bag-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BAG3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Bag-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Bag-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BAG3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Bag-3 HDR-Plasmid (h) und Bag-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BAG3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BAG3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.