BAF53B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409940

Übersicht

ACTL6B kodiert BAF53B, eine aktinverwandte Proteinuntereinheit neuronangereicherter, ATP-abhängiger SWI/SNF-(BAF)-Chromatin-Remodeling-Komplexe, die die Nukleosomenpositionierung und die Chromatinzugänglichkeit regulieren. BAF53B unterstützt Transkriptionsprogramme, die für die neuronale Differenzierung, die dendritische und synaptische Reifung sowie die aktivitätsabhängige Genregulation erforderlich sind, indem es zusammen mit anderen BAF-Komponenten die Nutzung von Enhancern und Promotoren moduliert. Über diese epigenetischen Funktionen ist ACTL6B mit Signalwegen verknüpft, die das Timing der Neuroentwicklung, neuronale Konnektivität und Plastizität steuern. Genetische und funktionelle Störungen von ACTL6B/BAF53B wurden mit neuroentwicklungsbedingten Störungen sowie veränderten neuronalen Genexpressionszuständen in Verbindung gebracht, die in Modellen kognitiver und verhaltensbezogener Phänotypen relevant sind.

Das BAF53B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACTL6B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACTL6B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACTL6B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BAF53B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACTL6B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BAF53B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACTL6B-Exone abzielen, die für die BAF53B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACTL6B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BAF53B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BAF53B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACTL6B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BAF53B HDR-Plasmid (h) und BAF53B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACTL6B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACTL6B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.