Plásmido Doble Nickase (h) BAF53: sc-403200-NIC

ACTL6A codifica BAF53A, una subunidad relacionada con la actina del complejo de remodelación de cromatina SWI/SNF (BAF) dependiente de ATP, que modula el posicionamiento de los nucleosomas y la accesibilidad de la cromatina. Mediante la regulación del panorama de potenciadores (enhancers) y promotores, BAF53A contribuye al control transcripcional de la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y el mantenimiento de estados proliferativos, conectando con vías como los programas transcripcionales asociados a MYC y E2F. La actividad alterada de ACTL6A/BAF53A se ha vinculado con un control epigenético desregulado en múltiples contextos de cáncer y con una expresión génica del desarrollo aberrante, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar fenotipos impulsados por la cromatina. El análisis funcional de ACTL6A respalda la investigación mecanística sobre dependencias de remodelación de cromatina, plasticidad transcripcional y arquitectura reguladora a escala genómica en células humanas.

BAF53 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACTL6A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACTL6A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACTL6A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACTL6A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.