Plásmido CRISPR de Activación (m) BACH1: sc-419283-ACT

Bach1 codifica el factor de transcripción BTB and CNC homology 1 (BACH1), un regulador sensible al hemo que modula los programas de estrés oxidativo al asociarse con proteínas Maf pequeñas y unirse a elementos de reconocimiento Maf en los promotores diana. En células de ratón, BACH1 actúa como un nodo clave de la homeostasis redox, influyendo en la expresión de genes citoprotectores como Hmox1 y coordinando respuestas frente a las especies reactivas de oxígeno, el metabolismo del hierro/hemo y la señalización inflamatoria. A través de estos mecanismos, BACH1 se entrecruza con vías que controlan la función mitocondrial, las decisiones de destino celular y la remodelación transcripcional inducida por estrés. La actividad desregulada de BACH1 se ha asociado con respuestas alteradas al daño oxidativo y se ha estudiado en contextos relacionados con la inflamación, la neurodegeneración y la biología tumoral como regulador de la adaptación celular al estrés.

BACH1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bach1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BACH1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bach1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bach1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BACH1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bach1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BACH1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BACH1 en células tumorales con expresión de Bach1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.