BACE2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403147-ACT

BACE2（β部位APP切断酵素2）はI型膜貫通型のアスパラギン酸プロテアーゼで、制御された膜内タンパク質分解（regulated intramembrane proteolysis）に関与し、特定の膜タンパク質の輸送（トラフィッキング）やターンオーバーに影響を与えます。ヒト細胞においてBACE2は、エンドソーム―リソソーム系でのプロセシングや分泌コンパートメントの動態に関わるプロテオスタシス経路と関連づけられており、アミロイド前駆体タンパク質（APP）ファミリーのプロセシングとの機能的なつながりや、より広範な基質依存的シグナル伝達への影響も示されています。BACE2の発現と活性は、神経生物学や代謝制御などの文脈で研究されており、プロテアーゼによるプロセシングの変化が細胞の恒常性を乱し得ることが示唆されています。これらの特性により、BACE2は疾患関連モデル系において、プロテアーゼ駆動のネットワーク再編成や経路間クロストークを検討するための有用な標的となります。

BACE2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BACE2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BACE2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BACE2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBACE2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BACE2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBACE2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBACE2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBACE2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBACE2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。