Plasmide Double Nickase (h) B7-2: sc-418032-NIC

CD86 (B7-2) est un ligand immunorégulateur co‑stimulatoire exprimé principalement par les cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à CD28 et à CTLA‑4 afin de moduler l’activation des lymphocytes T, l’anergie et l’équilibre des points de contrôle immunitaires. En s’intégrant à la signalisation du TCR, CD86 contribue à la formation de la synapse immunologique et à l’activation de voies en aval, notamment NF‑κB, MAPK et PI3K/AKT, influençant la production de cytokines et l’amorçage de la réponse immunitaire adaptative. Des altérations de l’expression de CD86 ont été rapportées dans divers contextes inflammatoires et auto‑immuns ainsi que dans les microenvironnements tumoraux immunitaires, où elles peuvent affecter la présentation de l’antigène et l’amplitude des réponses lymphocytaires. En conséquence, CD86 est fréquemment étudié dans des essais portant sur la maturation des cellules dendritiques, la polarisation des macrophages et la dynamique de co‑stimulation des lymphocytes T.

B7-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD86 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD86. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD86. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD86.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.