Plásmido CRISPR de Activación (m) B7-2: sc-419575-ACT

El gen Cd86 del ratón codifica la proteína coestimuladora B7-2, de la superfamilia de las inmunoglobulinas, un ligando de superficie en las células presentadoras de antígeno que interactúa con CD28 y CTLA-4 para modular la activación, la proliferación y la producción de citocinas de las células T. B7-2 participa en la formación de la sinapsis inmunológica y se integra con la señalización del receptor de antígeno para moldear las respuestas inmunitarias adaptativas, incluida la polarización Th y los mecanismos de tolerancia. La expresión alterada de CD86 se utiliza comúnmente como indicador de activación de células dendríticas y macrófagos, y está implicada en la biología de enfermedades inflamatorias y autoinmunes, así como en la inmunología tumoral, mediante la modulación de la señalización de puntos de control.

B7-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cd86 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B7-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cd86 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cd86, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B7-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cd86 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B7-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B7-2 en células tumorales con expresión de Cd86 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.