Plásmido CRISPR de Activación (h) B-Myb: sc-401318-ACT

MYBL2 codifica el factor de transcripción humano B-Myb, un regulador de la familia Myb necesario para la progresión del ciclo celular y para programas de expresión génica proliferativos. B-Myb favorece la entrada en fase S y la progresión mitótica al coordinar redes transcripcionales que convergen con la actividad de las CDK, la señalización dependiente de E2F y los procesos de replicación y reparación del ADN. La expresión desregulada de MYBL2 se ha asociado con inestabilidad genómica y alteraciones en el control de los puntos de control (checkpoints), y con frecuencia se vincula a fenotipos proliferativos en diversos contextos relevantes para el cáncer. Como regulador transcripcional nuclear, B-Myb se estudia comúnmente por su papel en la expansión de linajes, las respuestas al estrés y el control transcripcional de módulos génicos de G2/M.

B-Myb El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYBL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B-Myb El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYBL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYBL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B-Myb. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYBL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B-Myb en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B-Myb en células tumorales con expresión de MYBL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.