AZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406801

Übersicht

Das humane OAZ1-Gen kodiert Antizyme 1 (AZ1), einen zentralen negativen Regulator des Polyaminstoffwechsels, der die intrazellulären Spiegel von Putrescin, Spermidin und Spermine begrenzt, indem er an Ornithindecarboxylase (ODC) bindet und deren ubiquitinunabhängigen proteasomalen Abbau fördert. Durch die Begrenzung von Polyamin-Biosynthese und -Transport beeinflusst AZ1 grundlegende Prozesse wie Zellzyklusprogression, Translation und stressadaptive Wachstumsprogramme. Die OAZ1-Expression wird streng über einen polyaminresponsiven +1 ribosomalen Frameshift kontrolliert und bildet damit einen Rückkopplungskreis, der die Polyamin-Homöostase stabilisiert. Eine fehlregulierte Polyaminkontrolle unter Beteiligung von OAZ1 wurde mit proliferativen Signalzuständen und veränderten metabolischen Abhängigkeiten in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen wachstumsassoziierten Pathologien beobachtet werden.

Das AZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des OAZ1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des OAZ1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von OAZ1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AZ1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von OAZ1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AZ1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf OAZ1-Exone abzielen, die für die AZ1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere OAZ1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des OAZ1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AZ1 HDR-Plasmid (h) und AZ1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von OAZ1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten OAZ1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.