Particules Lentivirales d'Activation (m) Autotaxin: sc-422180-LAC

Enpp2 code l’autotaxine, une lysophospholipase D sécrétée qui convertit la lysophosphatidylcholine en acide lysophosphatidique (LPA), un médiateur lipidique bioactif qui signale via les récepteurs du LPA pour réguler la migration cellulaire, le remodelage du cytosquelette, la prolifération et la survie. Dans les tissus murins, la signalisation autotaxine–LPA contribue au développement vasculaire et lymphatique, au trafic des cellules immunitaires et au remodelage de la matrice extracellulaire, en s’intégrant à des cascades de signalisation via des GPCR telles que RhoA/ROCK, PI3K–AKT et MAPK/ERK. Une activité ENPP2/autotaxine dérégulée et une production accrue de LPA sont associées à des processus inflammatoires et fibrosants et ont été étudiées dans la biologie du microenvironnement tumoral, l’angiogenèse et des phénotypes liés aux métastases. En tant qu’enzyme soluble, l’autotaxine constitue également un point d’entrée exploitable pour analyser la dynamique de la signalisation lipidique dans les milieux conditionnés et l’espace extracellulaire.

Les particules d'activation lentivirales Autotaxin (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Enpp2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Autotaxin (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Enpp2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Autotaxin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Enpp2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.