atrophin-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404346-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das atrophin-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- atrophin-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und atrophin-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RERE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: atrophin-2: sc-81115
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
atrophin-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
atrophin-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RERE kodiert Atrophin-2, einen nukleären transkriptionellen Koregulator, der mit chromatinmodifizierenden Komplexen interagiert, um während der Entwicklung und der Festlegung von Zellschicksalen Genexpressionsprogramme zu koordinieren. Atrophin-2 trägt über Wechselwirkungen mit nukleären Rezeptoren und epigenetischen Regulatoren sowohl zur transkriptionellen Repression als auch zur Aktivierung bei und steht damit in Verbindung mit Differenzierung, neurodevelopmentalen Prozessen und abstammungslinienabhängigen Signalausgängen. Eine gestörte RERE-Funktion ist mit Entwicklungssyndromen und kongenitalen Anomalien assoziiert, und eine veränderte transkriptionelle Kontrolle unter Beteiligung von Atrophin-2 wurde im Kontext neurologischer Phänotypen untersucht. Als Regulator einer vom Chromatinzustand abhängigen Transkription ist RERE relevant, um zu untersuchen, wie epigenetische Kontrolle die Zellidentität und stressresponsive Gennetzwerke formt.
atrophin-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RERE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RERE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RERE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RERE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.