Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP8A1 (h): sc-406843

Présentation

ATP8A1 code une flippase de phospholipides de type P4-ATPase qui maintient l’asymétrie lipidique de la membrane plasmique en transloquant des aminophospholipides tels que la phosphatidylsérine et la phosphatidyléthanolamine entre les deux feuillets membranaires. Par cette activité, ATP8A1 favorise la courbure membranaire, le bourgeonnement vésiculaire et le trafic endocytique, en influençant l’organisation du cytosquelette et la dynamique membranaire polarisée. La perturbation de l’asymétrie lipidique peut modifier les plateformes de signalisation et les processus dépendants de la membrane, reliant ainsi la fonction d’ATP8A1 à des voies qui régulent le transport intracellulaire et la survie cellulaire. La dérégulation d’ATP8A1 a été étudiée dans le contexte de phénotypes neurologiques et métaboliques, où la composition membranaire et le trafic constituent des déterminants clés de l’homéostasie cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP8A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP8A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP8A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP8A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP8A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP8A1 pour l'étude de la signalisation de ATP8A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP8A1 essentiels à la fonction de ATP8A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP8A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP8A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATP8A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP8A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP8A1 plasmide HDR (h) et le ATP8A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP8A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP8A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.