ATP5S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406318

Übersicht

ATP5S kodiert eine kleine akzessorische Untereinheit des mitochondrialen F1F0-ATP-Synthase-Komplexes (Komplex V), der die ATP-Produktion mithilfe der protonenmotorischen Kraft katalysiert, die durch die oxidative Phosphorylierung erzeugt wird. Eine korrekte ATP5S-Funktion unterstützt die mitochondriale Bioenergetik, die Aufrechterhaltung des Membranpotentials sowie die Koordination des zellulären Energiestoffwechsels mit Prozessen wie Apoptose und der Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies. Störungen in der Assemblierung der ATP-Synthase oder der Aktivität von Komplex V werden mit mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht – einem Kennzeichen, das bei einer Reihe von Zuständen beobachtet wird, darunter neuromuskuläre und neurodegenerative Phänotypen sowie die metabolische Umprogrammierung von Tumoren. Daher ist ATP5S für Studien zur mitochondrialen Atmung, zu Energiestress-Antworten und zu mitochondrialen Signalwegen relevant, die Entscheidungen über das Zellschicksal beeinflussen.

Das ATP5S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP5S-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP5S-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP5S nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP5S-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP5S-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP5S-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP5S-Exone abzielen, die für die ATP5S-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP5S-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP5S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATP5S CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP5S-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP5S HDR-Plasmid (h) und ATP5S HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP5S-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP5S-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.