Particules Lentivirales d'Activation (m) ATP5J: sc-419251-LAC

Atp5j code pour l’ATP5J, une petite sous-unité accessoire de l’ATP synthase mitochondriale F1F0 (complexe V) qui soutient l’assemblage et la stabilité de l’holoenzyme, indispensables à une phosphorylation oxydative efficace. En contribuant à la production d’ATP et au maintien de la force proton-motrice mitochondriale, l’ATP5J influence la bioénergétique cellulaire, le potentiel de membrane mitochondrial et l’homéostasie rédox. Une perturbation des composants du complexe V peut modifier les flux métaboliques, augmenter les espèces réactives de l’oxygène et déclencher des réponses de stress compensatoires telles que la mitophagie et la signalisation intégrée du stress. En tant que nœud central du métabolisme énergétique, l’ATP5J est pertinent dans des modèles expérimentaux de dysfonction mitochondriale impliqués dans la neurodégénérescence, des phénotypes cardiométaboliques et le remodelage bioénergétique tumoral.

Les particules d'activation lentivirales ATP5J (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Atp5j dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATP5J (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Atp5j, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATP5J. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Atp5j ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.