ATP5I Double Nickase Plasmid (h): sc-410696-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATP5I Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATP5I Double-Nickase-Plasmid (h) und ATP5I Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP5I abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATP5I Double Nickase Plasmid (h) | sc-410696-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP5I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410696-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP5I kodiert eine kleine, integrale Membranuntereinheit der mitochondrialen ATP-Synthase (Komplex V), die zur korrekten Assemblierung und Stabilität des F0-Sektors beiträgt und die oxidative Phosphorylierung unterstützt. Indem ATP5I eine effiziente Kopplung der protonenmotorischen Kraft an die ATP-Produktion ermöglicht, hilft es, die zelluläre Energiehomöostase, das mitochondriale Membranpotenzial und das Redoxgleichgewicht aufrechtzuerhalten. Störungen von ATP-Synthase-Untereinheiten können die Funktion der Elektronentransportkette beeinträchtigen, reaktive Sauerstoffspezies erhöhen und metabolische Signalwege verändern, die Apoptose- und Stressantworten beeinflussen. Eine dysregulierte mitochondriale Bioenergetik unter Beteiligung von Komplex-V-Komponenten wurde mit einer Reihe mitochondrialer Erkrankungen sowie breiteren Phänotypen in Verbindung gebracht, die insbesondere energiebedürftige Gewebe betreffen.
ATP5I Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP5I-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP5I abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP5I-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP5I-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.