ATP11C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435843

Übersicht

Atp11c kodiert ATP11C, eine P4-ATPase‑Phospholipid-Flippase, die die Lipidasymmetrie der Plasmamembran aufrechterhält, indem sie Aminophospholipide wie Phosphatidylserin von der äußeren auf die innere Membranhalbebene verlagert. Diese Aktivität unterstützt Vesikeltransport, Endozytose und Membran-Remodeling-Prozesse, die die Rezeptorsignalgebung und Programme zum Zellüberleben beeinflussen. In der Maus wurde die Funktion von ATP11C mit der Homöostase des hämatopoetischen und des Immunsystems in Verbindung gebracht; Störungen beeinflussen die B‑Zellentwicklung und die Erythropoese, was sie für Studien zu immundefizienzähnlichen Phänotypen und anämiebezogenen Mechanismen relevant macht. Eine veränderte, durch ATP11C gesteuerte Verteilung von Membranlipiden kann zudem die Beseitigung apoptotischer Zellen und die inflammatorische Signalgebung modulieren, indem Phosphatidylserin an der Zelloberfläche exponiert wird.

Das ATP11C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atp11c-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atp11c-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atp11c nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP11C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atp11c-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP11C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Atp11c-Exone abzielen, die für die ATP11C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atp11c-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP11C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ATP11C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atp11c-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP11C HDR-Plasmid (m) und ATP11C HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atp11c-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atp11c-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.