Plasmide Double Nickase (h) ATIII: sc-403735-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATIII correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATIII Double Nickase (h) et le plasmide ATIII Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SERPINC1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATIII Antibody (H-7): sc-271987
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATIII | sc-403735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATIII | sc-403735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SERPINC1 code l’antithrombine III (ATIII), un inhibiteur de protéases à sérine sécrété qui limite la coagulation en inactivant la thrombine ainsi que des facteurs activés tels que FXa et FIXa, une activité potentialisée par le sulfate d’héparane et l’héparine. ATIII est un régulateur central de l’hémostase et interagit avec des cascades de protéases qui contrôlent la formation de fibrine, l’homéostasie endothéliale et la signalisation de coagulation liée à l’inflammation. Les variations de SERPINC1 ou une diminution de son activité fonctionnelle sont associées à une coagulation dérégulée et à une prédisposition thrombotique, ce qui en fait un locus clé pour l’étude de l’équilibre des voies anticoagulantes. Comme ATIII est produite principalement par les hépatocytes et circule dans tout l’organisme, SERPINC1 est également pertinente pour l’étude de la biogenèse des protéines sécrétées et du contrôle des protéases extracellulaires dans le plasma.
ATIII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SERPINC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SERPINC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SERPINC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SERPINC1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.