Plásmido Doble Nickase (h) ATGL: sc-401711-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ATGL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATGL (h) y el plásmido de doble nickasa ATGL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PNPLA2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATGL Anticuerpo (F-7): sc-365278
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ATGL | sc-401711-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ATGL | sc-401711-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PNPLA2 codifica la lipasa de triglicéridos del tejido adiposo (ATGL), la enzima limitante de la velocidad que inicia la hidrólisis de triacilglicéridos en las gotas lipídicas para liberar diacilglicéridos y ácidos grasos libres. La actividad de ATGL se coordina con proteínas de las gotas lipídicas y cofactores para regular la lipólisis, la disponibilidad de combustible y la adaptación metabólica, conectando el recambio intracelular de lípidos neutros con la β‑oxidación mitocondrial y con una homeostasis energética más amplia. En células humanas, la función alterada de PNPLA2/ATGL se asocia con un almacenamiento lipídico desregulado y estrés lipotóxico, lo que vincula esta vía con mecanismos relevantes para fenotipos metabólicos y para la investigación en biología de las gotas lipídicas.
ATGL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PNPLA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PNPLA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PNPLA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PNPLA2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.