Plasmide Double Nickase (h) Atg9a: sc-408011-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Atg9a correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Atg9a Double Nickase (h) et le plasmide Atg9a Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG9A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Atg9a Antibody (F-3): sc-518179
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Atg9a | sc-408011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Atg9a | sc-408011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG9A code pour Atg9a, le seul facteur central d’autophagie à transmembranes multiples (multi-pass) requis pour une biogenèse efficace des autophagosomes. Atg9a circule entre le réseau trans-Golgi, les endosomes et les sites d’assemblage du phagophore afin de soutenir l’apport et le remodelage membranaires, en coordonnant les étapes précoces de la macroautophagie et des voies d’autophagie sélective. Par ses fonctions dans le trafic vésiculaire, la gestion des lipides et le renouvellement dépendant des lysosomes, ATG9A influence la protéostasie et l’adaptation cellulaire au stress nutritionnel. Une autophagie dépendante d’ATG9A dérégulée a été associée à la neurodégénérescence, à la biologie des infections et à la tolérance au stress pertinente pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes liés à l’autophagie.
Atg9a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG9A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG9A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG9A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG9A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.