Plasmide Double Nickase (h) Atg16: sc-404024-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Atg16 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Atg16 Double Nickase (h) et le plasmide Atg16 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG16L1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Atg16 Antibody (E-10): sc-393274
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Atg16 | sc-404024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Atg16 | sc-404024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG16L1 code Atg16, un composant central du complexe ATG12–ATG5–ATG16L1, indispensable à la biogenèse des autophagosomes et à la lipidation de LC3/ATG8 lors de la macroautophagie. En coordonnant l’expansion du phagophore et la séquestration des cargos, ATG16L1 contribue à réguler l’homéostasie cellulaire, le contrôle qualité des protéines et des organites, ainsi que les réponses au stress métabolique et inflammatoire. L’autophagie dépendante d’ATG16L1 s’articule avec la signalisation de l’immunité innée, notamment la xénophagie antibactérienne et le contrôle de l’activité de l’inflammasome, reliant ainsi cette voie à la barrière muqueuse et à la régulation immunitaire. Des variations génétiques et une altération de la fonction d’ATG16L1 ont été associées à une susceptibilité accrue aux maladies inflammatoires chroniques de l’intestin et à une dérégulation des interactions hôte–microbiote, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles pertinents de cellules épithéliales et immunitaires.
Atg16 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG16L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG16L1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG16L1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG16L1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.