Plasmide Double Nickase (h) Atg12: sc-401894-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Atg12 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Atg12 Double Nickase (h) et le plasmide Atg12 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG12. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Atg12 Antibody (C-6): sc-271688
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Atg12 | sc-401894-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Atg12 | sc-401894-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG12 code Atg12, un modificateur de type ubiquitine qui est conjugué à ATG5 et s’associe à ATG16L1 pour former le complexe ATG12–ATG5–ATG16L1, un composant central de la biogenèse des autophagosomes. Ce complexe favorise la lipidation de LC3/ATG8 et entraîne l’expansion du phagophore au cours de la macroautophagie, reliant la détection des nutriments, le contrôle qualité des organites et la protéostasie à la dégradation lysosomale. Par ces fonctions, Atg12 contribue à façonner les réponses cellulaires au stress métabolique, aux dommages oxydatifs et aux agressions pathogènes, et une altération du flux autophagique a été impliquée dans la biologie du cancer, les maladies neurodégénératives et les troubles inflammatoires. Les voies dépendantes d’ATG12 sont donc fréquemment étudiées pour analyser la formation des autophagosomes, l’autophagie sélective et les réseaux de signalisation d’adaptation au stress.
Atg12 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG12. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG12. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG12.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.