Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ATF4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400155-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATF4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATF4 Double-Nickase-Plasmid (h) und ATF4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATF4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATF4: sc-390063
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATF4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der aktivierende Transkriptionsfaktor 4 (ATF4) ist ein stressresponsiver bZIP-Transkriptionsfaktor, der im Rahmen der integrierten Stressantwort (ISR) adaptive Programme der Genexpression koordiniert. ATF4 wird nach der Phosphorylierung von eIF2α nachgeschaltet an PERK, GCN2, PKR und HRI bevorzugt translatiert und treibt transkriptionelle Netzwerke an, die den Aminosäurestoffwechsel, die Redox-Homöostase, Autophagie und Apoptose regulieren – über Zielgene, die an der Glutathionsynthese, dem Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel und der Proteostase beteiligt sind. ATF4 ist mit ER-Stress- und Signalen der Unfolded-Protein-Response (UPR) verknüpft, einschließlich der Zusammenarbeit mit CHOP/DDIT3, und beeinflusst so Zellschicksalsentscheidungen unter proteotoxischem Stress oder Nährstoffmangel. Eine fehlregulierte ATF4-Aktivität wurde mit dem Überleben von Krebszellen unter Hypoxie und Nährstofflimitierung, mit Neurodegeneration und Proteostase-Erkrankungen sowie mit metabolischen und inflammatorischen Zuständen in Verbindung gebracht, bei denen die stressadaptive transkriptionelle Kontrolle verändert ist.
ATF4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATF4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATF4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATF4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATF4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.